Direct biochemical method for enzyme-assays in living cell cultures

Es wurden chemisch definierte einfache Nährmedien für Zellkulturen entwickelt, die das Substrat für das jeweils zu untersuchende Enzym-System enthalten. Der Ablauf der Reaktion wird im Gewebekultur-Überstand bestimmt. Es wurde keine Linearität zwischen dem Proteingehalt der Nährflüssigkeit und dem Abbau des Substrats gefunden, wenn kein erheblicher Zerfall der Zellen vorhanden war. Dies spricht dafür, daß vor allem intrazelluläre Enzyme für den Substratabbau verantwortlich sind, zumal in diesen verbesserten Versuchsmedien keine nennenswerten Hydrolase-Aktivitäten gefunden wurden. Die morphologische und funktionelle Integrität der Zellen während der Experimente wurde durch Vitalfärbung optisch kontrolliert. Es wurden die relativen, bzw. spezifischen Aktivitäten von saurer und alkalischer Phosphatase, 5-Nukleotidase, ATP-ase und RN-ase intakter Gewebekulturen gemessen. Ferner wurde der Einfluß von Salzen bzw. anderen Substanzen und bekannten „kompletten" Nährböden auf das Überleben und die Enzymaktivitäten von 4 verschiedenen Zellarten untersucht und mit den „analytischen" Nährlösungen verglichen. Die praktische Bedeutung dieser Methodik für Enzymund andere biochemische Bestimmungen in Zellkulturen wurde experimentell bewiesen, wie auch ihre Anwendbarkeit für das Studium verschiedener Probleme der Zellphysiologie bzw. Zellpathologie.